聚合酶链式反应技术及应用简介

聚合酶链式反应（PCR）又称为无细胞分子克隆系统,或特异性DNA序列体外走向酶促扩增法。该技术是由美国GetuS公司和加尼福利亚大学子1985年联合创建的。1988年,随着耐热聚合酶的商品化,PCR技术的应用得到了突飞猛进的发展,并因此在1989年被世界著名的《Science》杂志列为世界重大科学发明。PCR是90年代分子生物学领域的一项革命性突破,由于该技术敏感性高,特异性强,使用方便快捷,对原始材料质量要求低,现已在遗传性疾病、传染病及肿瘤诊断研究等领域得到广泛运用。1993年,PCR的发明人MSlliS因发明了PCR技术而获得诺贝尔…     

教师科研与实验教学相结合的成功尝试

结合天津市高校创新团队承担的国家自然科学基金项目,以更新生物技术及其相关专业综合实验项目为切入点,以节旋藻TJSD091藻株基因组的CRISPR位点引物为例,阐述了如何通过Touchdown PCR与梯度PCR技术结合确定PCR扩增最佳退火温度这一实验,激发学生的探究心理和学习兴趣,引导学生主动学习的做法,分析了将科研与实验教学相结合的优越性,认为该教学模式不仅培养了学生的科研思维、提高了学生解决实际问题的能力,而且可为应用型高校本科生实践教学体系的完善提供新思路。     

黑龙江汉族速滑运动员优秀耐力能力与肌型肌酸激酶基因（CKMM） A/G多态的关联研究

目的：研究黑龙江汉族速滑运动员优秀耐力能力与肌型肌酸激酶基因（CKMM）A/G多态的关联性。方法：应用PCR-RFLP法测定120名黑龙江籍汉族健康大学生及25名黑龙江汉族耐力型速滑运动员CKMM基因A/G位点的基因型和等位基因的频率分布。结果：大学生等位基因频率为A=87%,G=13%,基因型频率为A/A=76%,A/G=22%,G/G=2%;速滑运动员等位基因频率为A=84%,G=16%,基因型频率为A/A=68%,A/G=32%,经卡方检验符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,两组的基因型频率和等位基因频率在男女间无显著性差异,与欧美人群相比有显著性差异,与我国北方汉族人及韩国人相比差异不具有显著性。两组间基因型频率和等位基因频率无显著性差异。结论：黑龙江汉族耐力型速滑运动员的优秀耐力素质与CKMM基因N coⅠ多态性无关,该位点不能作为其耐力素质选材的遗传学标记。     

链式反应的计算机模拟

本文利用蒙特卡罗方法,通过定量分析建立了链式反应的计算机模拟数学模型,给出了链式反应模拟临界质量的计算流图.     

伞房属CCR基因PCR优化体系建立及多拷贝的发现和分析

对伞房属CCR基因进行扩增,对影响PCR的条件进行优化,结果筛选出引物对A-3198适宜的PCR循环条件为：94℃预变性5min;94℃变性30s,60℃退火lmin,72℃延伸2min,运行30个循环;最后72℃后延伸7min。对伞房属树种进行PCR扩增时,发现用同一引物对,一个样本可以扩增出不同长度的条带。将目的片段进行克隆测序,得到6个序列。所分析的基因片段从Exon3-Exon5,其中Exon3变异位点具有3个,Intron3无变异位点;Exon4变异位点具有7个,Intron4变异位点最多,达到276个,Exon5变异位点也只有6个。从变异位点所占百分数分析,所有外显子包括Exon3、Exon4和Exon5,变异数百分率很低,从1.67%-1.98%,说明外显子是相对保守和稳定的。Intron3最稳定,无任何差异位点。Intron4差异最大,差异百分数高达,19.99%。在Intron4有4处插入发生。第1处插入发生在第2041-2067,插入27个碱基。第2处插入发生在第2127-2289,插入163个碱基。第3处插入为PolyA,6个样本都存在PolyA。第4处为SSR序列。在外显子上未发现2个或2个以上碱基的插入/缺失。从氨基酸的变异来分析,所发生的核苷酸变异很多是无义突变,只有Exon3的2个氨基酸、Exon4的3个氨基酸,以及Exon5的2个氨基酸发生有义突变。本试验于国内外首次发现伞房属树种CCR基因具有多拷贝现象,而在桉树另外2个属桉属和杯果木属的CCR研究中未曾发现。     

斑节对虾白斑综合症杆状病毒检测方法及其应用

对白斑和红体带白斑斑节对虾光镜和电镜观察，对虾白斑综合症杆状病毒（WSBV）感染外胚层和中胚层组织器官．应用WSBVPCR检测技术证实一种WSBV感染鳃、甲壳表皮、神经和肌肉，在肝胰腺、消化管（含胃）、心脏和血液中未检测到，其结果与组织学观察有出入．PCR检测WSBV最佳取材部位是对虾甲壳表皮和肌肉．PCR方法可应用于WSBV的提纯，实验用健康虾的筛选，实验感染WSBV的跟踪，以及流行病学研究．通过PCR方法和电镜观察结合证实红体病斑节对虾（不带白斑者）不是WSBV所致，修正了前人的观点．     

发展出一种新型PCR方法

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外通过酶反应合成、扩增目标DNA片段的一种方法，也是最常用、最重要的分子生物学技术之一。上海应用物理研究所的胡钧、樊春海等与上海交通大学Bio—X中心的张治洲合作发展出一种新型PCR方法——“纳米粒子PCR”。该方法通过引入纳米领域的重要材料——纳米金粒子，     

饲料中马、驴源性成分的分子生物学检测技术

本研究根据马、驴线粒体DNA中的保守区段设计了一对引物，通过聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）采取马、驴、牛、羊、猪、鸡、兔、鹿、火鸡等实验材料进行扩增，可以专一地扩增出马、驴源性成分的DNA片段，再经限制性内切酶Sau3A和Alu I的酶切鉴定可以区分马源性成分和驴源性成分，PCR扩增产物的测序结果验证了酶切鉴定结果的正确性。引物灵敏度测试结果表明该方法的检测低限均达0．3％，该对引物可以成为检测马、驴源性成分高效准确的检测工具。     

基于链式反应规律的博士生教育规模调控模型

基于博士生教育动力学模型揭示的链式反应规律,构建数学模型及相应数值求解方案,实现调控时期成长指数随时间变化情况下博士生教育规模的全面定量分析。以“十五”“十一五”期间中国博士生教育从“积极扩大”到“相对稳定”为例,给出规模调控过程的数值模拟,结果表明:招生规模增速持续高于导师规模增速、直博招生推广使得平均修读时间增加和推动质量保障体系建设等因素,造成生师比不断升高而带来的潜在质量风险是当时主要挑战;该调控是多种因素综合作用的结果,其中招生规模成长指数均值于2003—2004年从约0.20降为约0.03是关键。基于数值模拟的定量分析,有利于更好地认识博士生教育发展规律,有助于推动高层次创新人才自主培养质量的全面提升。     

真菌的分子生物学鉴定方法

真菌的分子生物学鉴定的方法及原理,真菌DNA碱基组成的分类鉴定、DNA分子杂交、真菌mtDNA限制性片段长度分态性的分析以及随即扩增多态性DNA分析。