人胰岛素样生长因子Ⅰ型在E.coli和家蚕中的表达

将hIGF-I基因克隆进原核表达载体pET-28a( ),在E.coli中进行了融合表达,West-ern blotting显示在26 kD附近有一条特异条带。将hIGF-I基因克隆进pBacPAK-8,获得了杆状病毒转移载体pBacPAK-8-IGF-I,在脂质体的介导下,与线性化的家蚕杆状病毒共转染家蚕培养细胞Bm-N,经空斑筛选,PCR检测,获得了重组病毒Bm-Bac-hIGF-Ⅰ。SDS-PAGE检测表明,在感染重组病毒后,家蚕幼虫血淋巴中可以检测到一条分子量约为7.5 kD的特异性条带,ELISA检测表达量达4.51μg/mL蚕血淋巴。     

深圳25种植物提取物抑菌效果的研究

萃取提取25种园林植物提取物,用平板纸片法测定这些提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果．结果表明：不同植物的提取物对这2种细菌的抑制效果不同．其中,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌效果较好的有：海桐、蒲桃、百里香、白千层、山小橘、香樟．对大肠杆菌抑制效果最好的前3种植物是枫香、香樟和蒲桃,对金黄色葡萄球菌抑制效果最好的前3种植物是白千层、百里香和蒲桃．结果为保健生态园林植物选择提供依据．     

葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达优化

拟青霉（Paecilomyces sp.FLH30）β-1,3（4）-葡聚糖酶可在重组菌BL21（DE3）-pET28a/PsBg16A中表达.首先确定了该酶的细胞表达定位,再研究了诱导温度、诱导剂种类及浓度、诱导起始菌体密度、诱导时间等因素对重组菌生长及目的蛋白表达活性的影响.结果表明,IPTG和乳糖皆可诱导目的蛋白表达,乳糖的诱导效果优于IPTG.在诱导起始OD_（600）为3.2时加入10%乳糖,20℃诱导20 h最适于目的蛋白的表达.表达条件优化后,酶活可达到482.2U/mL.     

His-猪生长激素融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化

将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a( ),构建出能利用Ni-NTAAgarose柱一步纯化表达产物的重组质粒pPGH020。探讨了大肠杆菌中重组猪生长激素的最佳表达条件和纯化方法,制备并纯化了兔抗pGH抗体。SDS鄄PAGE和Westernblot的分析结果表明,26.5kD处有包括His·Taq、thrombin位点序列和pGH序列的融合蛋白特异条带。凝胶扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌胞浆蛋白的17.3%左右。     

鲑鱼生长激素基因酵母分泌表达质粒构建

用ＰＣＲ方法改造鲑鱼生长激素（ＧＨ）ｃＤＮＡ,在成熟蛋白编码序列５′端前加入ＥｃｏＲⅠ位点,改造后的ｃＤＮＡ通过平端连接插入质粒ＹＥＰＭ０４,使鲑鱼ＧＨ基因置于酵母ＭＦα１因子分泌肽前导序列后、并在ＭＦα启动子调控之下,成为大肠杆菌酵母穿梭质粒ＹＥＰＭ０４ｆＧＨ．重组子酶切分析表明,鲑鱼ＧＨ基因正向插入质粒ＹＥＰＭ０４的ＭＦα启动子和分泌肽序列之后     

重组肠激酶在大肠杆菌中的发酵与纯化

对重组肠激酶在大肠杆菌中的高密度发酵表达条件、纯化方法及其生物活性测定进行了研究。结果表明:在E.coli表达系统中,控制温度为37℃,培养基pH 7.4,当A600为8.0时,加入0.3mmol/LIPTG进行诱导,温度降低至30℃,连续诱导3 h,蛋白表达量达25%。经SDS-PAGE测定,纯化的重组肠激酶纯度达80%以上,并能高效切开融合蛋白。     

大肠杆菌TOP10F’中重组质粒pBAD／gⅢA-NTF2稳定性考察

本实验考察了基因工程茵Ecoli TOP10F’重组质粒pBAD／gⅢA—NTF2的稳定性。结果表明,该基因工程菌在连续传代30代后,质粒的目的基因片断没有缺失,具有结构稳定性;在无抗生素选择压力下,经传10代后,菌株的质粒没发生质粒丢失现象,20代后各代菌种质粒保有率低于100％,但50代后的菌种质粒保有率仍高达88％。因此,表现出一定的分离稳定性。该基因工程菌在优化培养基和优化条件下的整个发酵过程中,始终表现出良好的结构和分离稳定性。     

狗细菌性急性胆囊炎模型研究

为研究狗细菌性胆囊炎模型,将8只狗随机分成两组：正常对照组和急性胆囊炎模型组,两组都用盐酸塞拉嗪肌注麻醉后,正常对照组胆囊注入生理盐水0.3ml,急性胆囊炎模型组注入大肠杆菌0.3ml,正常饲养7d。与正常对照组相比,狗急性胆囊炎组白细胞数值,胆囊湿重指数,胆囊容积指数等变化极其显著（P〈0.01）。病理可见胆囊壁有大量的中性粒细胞浸入,胆囊壁水肿明显,增厚,胆汁颜色发暗,发现大量的中性粒细胞。向狗胆囊内注入大肠杆菌7天可成功的制成急性胆囊炎模型。     

芩榆散治疗鸡人工感染大肠杆菌病试验

目的:探讨芩榆散对鸡人工感染大肠杆菌病的治疗效果。方法:选取200羽14日龄罗曼公鸡,其中40只为空白对照组,治疗试验选取160羽接种大肠杆菌O1造病,次日将发病鸡随机分为4组,其中第1-3组分别为高、中、低剂量的药物治疗试验组,分别在饲料中添加3.0%、1.5%和0.75%的芩榆散,第4组为阳性对照组,不用药,第5组为空白对照组,各组连续处理5 d,第6 d统计各组的有效率。结果:高剂量组芩榆散的痊愈率(67.5%)和有效率(85%)最高,均显著高于阳性对照组。结论:该散剂可用于鸡大肠杆菌病的治疗。     

鲑鱼生长激素cDNA5'端和3'端的修饰与在原核细胞中表达的初步研究

为了研究鱼生长激素基因在大肠杆菌中的表达,采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对鲑鱼生长激素ｃＤＮＡ的５端和３端进行定向修饰．将修饰后的三种基因分别克隆到大肠杆菌表达质粒ｐＢＶ２２０,构建成重组鲑鱼生长激素表达质粒ｐＢＶＧＨ１１,ｐＢＶＧＨ１８和ｐＢＶＧＨ２４,转化大肠杆菌ＤＨ５α进行诱导表达．结果表明：核糖核蛋白体结合位点（ＳＤ）与起始密码子ＡＴＧ之间的距离对生长激素的表达水平影响极大．鲑鱼生长激素基因的终止密码子ＴＡＧ不能有效终止该基因在大肠杆菌中翻译的进行,造成部分通读．加入大肠杆菌强终止子ＴＡＡ可避免通读和产生超长蛋白,提高表达产量