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本研究旨在对人激肽释放酶7 (KLK7)基因进行原核与真核表达,研究其功能,并为后续KLK7新型生物抑制剂的研制提供基础材料。采用PCR扩增KLK7基因,将其克隆至原核表达载体pGEX4T-1和真核表达载体pEGFP-C1,构建重组表达质粒pGEX4T-1-KLK7和pEGFP-C1-KLK7,分别转化Transetta (DE3)和DH5α感受态细胞,筛选阳性菌株,用IPTG诱导重组KLK7蛋白（rKLK7）表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。将pEGFP-C1-KLK7转染人角质形成细胞HaCaT,观察KLK7在细胞中的定位,检测KLK7基因过表达对角质化细胞增殖的影响。KLK7基因开放阅读框为762 bp,编码254个aa。原核系统表达的rKLK7分子量为53.5 kDa。EGFP-KLK7融合蛋白定位在细胞质。KLK7的过表达对HaCaT细胞的增殖有一定的抑制作用,但差异不显著（P>0.05）。DNA检测表明,KLK7过表达可促进HaCaT细胞的凋亡。KLK7在原核表达系统和真核细胞中均成功表达,KLK7蛋白过表达对HaCaT细胞的增殖有一定的抑... 相似文献
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