重组NADP~+依赖甲酸脱氢酶的表达及纯化

利用甲酸脱氢酶(FDH)催化甲酸脱氢反应是酶促有机合成中重要的还原型烟酰胺辅酶再生系统。实验对E.coli BL21(DE3)/pET32/Bsp-FDH诱导表达NADP+依赖甲酸脱氢酶的表达条件进行了优化,在培养第4h加入0.4 mmol/l的IPTG、诱导时间8h、诱导温度30℃的诱导表达条件下,每升发酵液产甲酸脱氢酶170U。利用亲和层析法一步分离纯化重酶,纯化倍数为9.65、酶活回收达60.43%。实验为重组甲酸脱氢酶应用于有机合成中的NADPH再生奠定基础。