SDS-PAGE技术分析小麦高分子量谷蛋亚基组成的研究

为使十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术在分析小麦高分子量谷蛋亚基组成中广泛应用,以及为小麦品质遗传改良亲本选配提供参考依据,该研究利用SDS-PAGE技术对100个小麦骨干亲本及其衍生材料的高分子量谷蛋白亚基组成(HMW-GS)进行了分析,结果表明,在Glu-A1,Glu-B1和Glu-D1 3个位点上分别检测到2种、6种和2种不同的亚基类型;在Glu-A1位点Null亚基出现的频率最高,为82%,其次为100%(Glu-B1),第三点为18%(Glu-D1);在Glu-B1位点7+8亚基出现的频率最高,为56%;在Glu-D1位点2+12亚基出现的频率最高,为86%.共检测到13种HMW-GS组合类型,其中(N,7+8,2+12)和(N,7+9,2+12)出现的频率较高,分别为40%和23%.3个位点具有优质亚基的材料2个,占2%.供试材料具有的优质亚基及优质亚基组合较少,但它们的综合农艺性状较好,所以它们可作为优良亲本质源.SDS-PAGE技术分析小麦高分子量谷蛋亚基组成具有操作简便、快速、微量、价廉、分辨率高、稳定性好等特点.     

SDS-PAGE染色-脱色方法的改良

在传统的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术的基础上,对制备的凝胶进行快速染色-水洗脱色及提高灵敏度的探讨,建立改良的SDS-PAGE染色-脱色法。与传统的方法比较,快速法在不影响检测灵敏度的情况下,大大缩短了分析所需时间,整个分析过程只需40~60min,并且降低了实验成本,有重要的推广价值。提高灵敏度法可检测到0.1~0.5μg蛋白/条带。     

蛋白质谱型分析在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌鉴定中的应用研究

目的 :从生化途径探索耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)鉴定的新方法及其对甲氧西林的耐药机理。方法 :采用细菌透析袋表面培养法 ,通过十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-QAGE) ,分析菌株蛋白质代谢产物谱形。结果 :MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌 (MSSA)的蛋白质代谢产物SDS-PAGE谱形分析存在明显可资鉴别的差异。结论 :该方法为MRSA鉴定新方法的建立提供了可行性依据 ,为进一步研究MRSA的耐药机理提供一个可参考的研究线索     

五种深海鱼提取蛋白的SDS-PAGE分析

为了给深海鱼类提取蛋白质的深加工提供参考,以三文鱼、狭鳕、比目鱼、小黄鱼和带鱼五种深海鱼为试验材料,采用酸碱法提取鱼肉中蛋白质,通过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析,研究了提取蛋白质的亚基构成及其相对含量.结果表明,(1)五种鱼的提取蛋白质电泳图谱差异较大,分别由不同数量和不同分子量的亚基构成.三文鱼、狭鳕、比目鱼、黄鱼和带鱼的亚基数量分别为14、13、13、14和12个;(2)五种鱼的提取蛋白质的亚基相对平均含量变异范围为7.15~8.35%,变异系数变异范围为38.15~78.63%.亚基相对含量大于10%的较大亚基的数量和分子量因鱼的种类而异.五种鱼的提取蛋白质亚基数量、分子量和相对含量均存在差异,说明其蛋白质构成不同,因而可能有不同的营养价值.     

重组人B淋巴细胞刺激因子原核表达初探

借助SDS－PAGE分析方法，以重组人B淋巴细胞刺激因子（rhBLyS）蛋白表达宿主菌株M15（pQE30a/rhBLyS）作为研究对象，对于用IPTG诱导的重组目的的产物的表达进行了优化研究，分析比较了诱导时间、IPTG浓度、温度等参数对重组产物表达的影响。实验结果表明，降低温度和IPTG浓度有利于增加靶蛋白的可溶性，27℃和0．075mmol/L为比较适合的表达条件。     

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离拟南芥叶片实验教学的改进

目的:改进拟南芥叶片的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离方法。方法:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离拟南芥叶片。主要比较和分析了两种样品溶解液和两种染色方法对实验的影响。改进的样品溶解液可防止样品的损失,节约样品和试剂;改进的染色方法操作时间短,灵敏度高,分离条带多且清晰。结论:改进的实验方法可以得到更为灵敏、清晰的实验结果,同时节约了实验经费和实验时间,减少了实验准备人员的工作量,更好地适应和促进了实验教学工作。     

绿色荧光蛋白的原核表达和纯化及鉴定的实验设计与实践

该文以绿色荧光蛋白FRP为实验对象,通过设计原核蛋白表达、镍柱亲和纯化、荧光光谱分析、SDSPAGE电泳分离、Western blotting免疫印迹及蛋白质质谱鉴定等内容的生物化学综合实验,提高学生的生物化学实验技能。荧光光谱分析表明,纯化的GFP蛋白的最大激发波长为480nm,最大发射波长为500nm,与已知的GFP荧光光谱基本相同。SDS-PAGE电泳分离发现,GFP的亲和纯化效果好,且纯化得到的GFP分子量约为27kDa,与理论值相符。该实验适用于生物科学专业本科生系统完整地学习蛋白质表达、纯化和鉴定的实验方法,具有很好的综合性,取得非常好的教学效果。     

Extraction and Isolation of Type Ⅰ ,Ⅲ and Ⅴ Collagens and Their SDS-PAGE Analyses

Type Ⅰ,Ⅲ and Ⅴ collagens were extracted from bovine dermis and cornea by using pepsin treatment in acetic acid solution,followed by salt precipitation and dialysis,to purify and isolate each type of collagens.The preparation process was analyzed by using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE).A reducing agent,2-mercaptoethanol,was used to remove disulfide bonds and analyze the structure of the bonds involved between α chains in some types of collagens.The use of delayed reducin...     

Extraction and Isolation of Type Ⅰ Ⅲ and Ⅴ Collagens and Their SDS-PAGE Analyses

Type Ⅰ,Ⅲ and Ⅴ collagens were extracted from bovine dermis and cornea by using pepsin treatment in acetic acid solution,followed by salt precipitation and dialysis,to purify and isolate each type of collagens.The preparation process was analyzed by using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE).A reducing agent,2-mercaptoethanol,was used to remove disulfide bonds and analyze the structure of the bonds involved between α chains in some types of collagens.The use of delayed reducing methods resulted in the difference between α1(Ⅲ) and α1(Ⅰ) chains in a mixture containing type Ⅰ and Ⅲ collagens.The structure of disulfide bonds among α chains exists potentially in type Ⅴ collagen prepared from the pepsin-treatment extraction at 4℃,which differs from type Ⅲ collagen in relation to the locations of disulfide bonds.Compared with pepsin-treated collagen at 4℃,the relative molecular weights of α1(Ⅴ) and α2(Ⅴ) chains treated at room temperature decrease by 4.6% and 6.0%,respectively.It is concluded that type Ⅰ,Ⅲ and Ⅴ collagens can be prepared from bovine dermis and cornea by the use of pepsin treatment,salt precipitation and dialysis.The interchain disulfide bonds lie potentially near the edges of termini of type Ⅴ collagen molecules in extracellular matrix,and a small number of interchain crosslinks exist in type Ⅴ collagen.     

A STUDY ON THE CROSSLINK ABILITY OF DIFFERENT COMPONENTS IN COLLAGEN AND GELATIN

1IntroductionCrosslinkreferstochemicalbondingamongpeptidesandcollagen(gelatin)moleculesbyN-terminalgroups.Asearlyasthe1950s.J-Pouradieretal.lhadstartedaseries0fstudiesoncrossIinkofgelatinm0lecules-GraesserW2disc0veredthatonlylargepeptidessuchasa,P,Ycomponentstookpartinthecrosslinkprocess.Withtheincrease0flittlepeptides,therewouldbemoreH-bondsamongthemolecules.J.Rottmannetal.3thinkthattherearetwostepsduringthecrosslinkprocess:Therateofthefirststepismuchbiggerthanthat0fthesecondone.It'swell…