T克隆载体的构建

以高拷贝克隆载体pUC118为骨架载体,在pUC118质粒Amp~r基因的Eam11057酶切位点上,以点突变的方式封闭Eam11051酶切位点,将一人工合成的具有两个Eam11051酶切位点的互补寡聚核苷酸链(两端具有BamHI接头)插入已封闭Eam1105I酶切位点的pUC118质粒的BamHI位点,构成新的克隆载体,此质粒命名为pUC118E,该载体经Eam11051酶切后,可产生3’端突出一个T碱基的T-vector,能与PCR产物直接连接,经转化大肠杆菌JM109证实,该改造过的pUC118质粒,仍可使宿主细胞具有氨苄抗性,可作为氨苄选择标记的克隆载体。