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目的:构建、筛选并鉴定出重组GFP唾液乳杆菌CCFM6105。方法:利用GFP作为报告基因,从携带gWiz-GFP质粒的大肠杆菌中提取质粒,将gWiz-GFP质粒电转化至唾液乳杆菌CCFM6105中,构建GFP唾液乳杆菌。结果:PCR产物电泳结果显示约在750bp处出现明亮条带,PCR反应成功;在1800V电压下的菌落荧光暗沉;在2400V电压下的菌落荧光致密明亮;在2200V、2600V电压下菌落荧光偏暗;各代重组菌的GFP表达良好且无明显减弱。结论:本实验成功构建GFP唾液乳杆菌CCFM6105且GFP在唾液乳杆菌在稳定遗传中得到了稳定的表达。 相似文献
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在现有电转化和聚乙二醇/醋酸锂(PEG/LiAc)诱导的化学转化的基础上,进一步研究和探索了酿酒酵母感受态细胞不同预处理及相应的转化条件对转化效率的影响。结果表明:处于对数生长早期(OD600=0.6)的酵母细胞的转化效果最佳;电转化中分别以120 mmol/L的DTT和300 mmol/L的LiAc预处理感受态酵母菌10 min,可以得到较高的转化效果;联合使用120 mmol/L DTT和300 mmol/L LiAc能大幅提升酵母转化效率,达到7.15×105cfu/μg,PEG/LiAc诱导的化学转化中使用300 mmol/L LiAc能大幅提升酵母转化效率,达到2.75×105cfu/μg,远高于文献报道的水平。同时证明了改进后的转化方法同样能够提高外源DNA同源重组转化效率。 相似文献
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