例析限制酶切割难题现象

<正>近年来,选择合适限制酶对目的基因和质粒进行切割似乎成为高考的一个热点,如江苏、天津等地的高考试题中,多次涉及限制酶切割目的基因和质粒的问题。由于考生对限制酶识别序列及切割点产生的黏性末端认识不清,导致该类试题时常成为难题。这类试题考查的能力主要包括以下几个方面。     

解读浙江选考题中的农杆菌转化法

本文从农杆菌Ti质粒的介绍、重组质粒导入农杆菌的方法、农杆菌侵染植物细胞机理和转化法的影响因素4个角度,深入解读了近几年浙江选考题中涉及的农杆菌转化法.     

用十二烷基硫酸钠消除枯草芽孢杆菌中的质粒

为获得宿主菌 ,研究了十二烷基硫酸钠 (SDS)对枯草芽孢杆菌中质粒的消除 .将过夜培养的枯草芽孢杆菌2 4/pMX45接种于含SDS( 0— 0 .0 0 8% )的LB培养基中 ,当SDS浓度 (w /v)大于或等于 0 .0 0 6 %时 ,菌体不能生长 .SDS的亚致死浓度为 0 .0 0 5 % ,其致死率达 99% .菌液稀释后涂LB平板 ,再随机挑选单菌落至抗性平板 ,检测由质粒编码的红霉素抗性是否丢失 .氯化铯 溴化乙锭梯度离心及质粒DNA的电泳图像证实了 2 4/pMX45的衍生菌株A7中的质粒已完全被消除 .A7延迟期较短 ,并且细胞浓度高于 2 4/pMX45 .用SDS处理 8h后 ,2 4/pMX45的遗传标记开始丢失 ,消除率持续增高至 2 2h ,随之消除质粒的菌体量保持恒定 .在未经SDS处理的对照实验中 ,相同条件下培养 2 4h及 48h后 ,没有发现质粒自然丢失的现象 ,因此SDS能消除枯草芽孢杆菌中的质粒     

石英晶体微天平-环介导快速检测大肠杆菌O157特异基因方法的建立

目的:建立原位石英晶体微天平(QCM)-环介导恒温扩增(LAMP)快速检测大肠杆菌O157特异基因的方法。方法:在环介导恒温核酸扩增(LAMP)技术平台引入石英晶体微天平(QCM)技术,采用巯基化试剂分子组装方法,将LAMP反应体系中的4个引物之一固定于QCM电极上,在安装所述电极的QCM检测池中配置O157 LAMP反应体系进行环介导恒温核酸扩增,用QCM仪器在线检测频率变化,判断LAMP反应是否发生,进而判断体系中是否存在O157特异基因。结论:该方法检测O157特异基因特异性强、灵敏度高,并且操作简便,有望发展成为快速检测O157特异基因的有效手段。     

更正

正2014年第3期第15页的文章"2013《nature》的中国声音(上)"名字错误,"许琛"应为"许琛琦",特此更正。许琛琦研究员中国科学院上海生命科学研究院2004年赴美国哈佛大学医学院Dana-Farber肿瘤研究所从事免疫学研究,先后为博士后(受美国关节炎基金会资助),讲师。2009年6月回生化与细胞所工作,担任研究员,研究组长。主要研究方向包括:生物膜对受体功能的动态调控和T细胞介导型自身免疫病的发病机制。     

植物基因是如何转移的?

正把一种外源性基因转移到另一种原来并不含这种基因的生物体内是基因的拼接和重组,也就是转基因,这种技术是基因工程的一种形式。目前的转基因主要分为对植物基因和对动物基因的转移两大类。本文描述的是植物转基因。转移植物基因的两种方法一种或多种外源性基因是如何转入另一种植物(作物)体内的呢?可以用一种通俗的比喻来解释。例如,人类社会是由无数个家庭组成的,每个家庭都有固定的家庭成员,除了血缘的紧密纽带关系外,还有经济和其他的关系把家庭成员固定在一起,家庭成员不会轻易分离,同时一个家庭也不会让陌生人进入。一旦有另一     

DNA免疫的研究进展

综述了DNA免疫的产生与发展历史及增强DNA免疫的多种途径和方法。     

高温抗药性细菌的质粒检查

从堆肥和污泥中分离得到一批高温抗药性细菌，经琼脂凝胶电泳检查，发现其中-菌株T703-S1有质粒存在。     

质粒DNA提取及电泳检测实验改革

为进一步增强学科间的交叉与渗透,提高学生灵活运用多学科知识与方法的能力,对质粒DNA提取及电泳检测实验进行改革。在改进经典碱裂解法提取质粒DNA、琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA的基础上,新增试剂盒方法提取质粒DNA、超微量分光光度计检测质粒DNA以及快速单酶切鉴定质粒DNA等实验内容。改革后的实验不仅促进经典与现代技术、方法的有机结合,而且增强学科间的相互融合,取得了良好的教学效果。