用地高辛标记的DNA探针进行无放射性原位杂交

组织切片、细胞染色体上DNA和RNA的原位杂交已逐渐成为细胞生物学的一种重要手段。最初这一方法用放射性同位素标记探针,用放射自显影来检测核酸,至今已使用了20多年,但这种方法存在许多不足之处:1.不宜暴露时间过长;2.放射性同位素的寿命有限;3.实验需在同位素室内进行,并且存在问题;4.放射自显影中,银颗粒通常扩散,不能在杂交靶点上直接精确定位。为了解决这一问题,逐渐建立了无放射性标记及检测系统,为原位杂交信号提供了快速可靠的信息,大多数系统涉及核酸分子的酶的、化学的、光化学的修饰,然后经与一个非放射性报告系统的特殊连结进行修饰探针的测定。与~3H]标记的DNA探针相比,非放射性标记系统检测可以紧跟在原位杂交之后,杂交信号通常可在靶点上直接发现,并且可在不同的检测系统中看到,另外,探针可以贮存至少数年,并且在一些系统中,同标记的探针还可应用于southern blots和其它分子生物学程序中。