Parasporin-2基因的诱变

Parasporin-2作为一个来自noninsecti-cidal和nonhemolytic苏云金芽孢杆菌的新晶体蛋白,可以识别并杀死肝脏和结肠癌细胞等某些类型的人类细胞。但是Bt存在着抗癌效价低的问题,严重制约着其发展推广。为了提高Bt菌种对癌细胞的杀伤效率,该文运用PCR介导的化学诱变技术使Parasporin-2基因发生随机突变,转入具有AMP抗性的大肠杆菌JM110中,筛选出一株具有较多突变的序列。突变体表达的蛋白与模板相比,改变了四个氨基酸:第32位的甘氨酸(G)突变为丝氨酸(S),第225位的苏氨酸(T)突变为丙氨酸(A),第242位的缬氨酸(V)突变为丙氨酸(A)以及第252位的谷氨酰胺(Q)突变成了精氨酸(R)。通过建模分析Parasporin-2WN在关键位点发生了一个氨基酸的突变,这个突变可能会对蛋白整体结构功能造成重大影响,而且对Parasporin-2突变体基因库的构建起到了很大作用。