| 摘 要： | 目的:通过灵芝菌生物转化大豆异黄酮,得到富含苷元及灵芝活性成分的多因子转化产物,并研究了转化产物对结直肠癌细胞HTL-9的体外凋亡诱导,初步探讨转化产物的抗癌活性及机理。创新点:灵芝是一种珍贵的药用真菌,大豆异黄酮的苷元物质也具有重要的药理活性,本文首次利用灵芝菌液体发酵的匀浆液生物转化大豆异黄酮,所得到的产物中大豆苷元与染料木素转化率高,同时还富集了灵芝菌的活性成分,并对转化产物的抗癌活性及机理进行了初步探讨。方法:首先利用灵芝菌液体发酵的匀浆体系生物转化大豆异黄酮(图1)。其次,对转化产物的抗癌活性进行研究,主要包括对癌细胞存活率(图2)、细胞凋亡(图3)及细胞周期分布(图4)的影响。最后,利用蛋白质印迹(Western-blot)与逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对凋亡相关的基因和蛋白进行检测(图5和表2),初步探讨转化产物的体外抗癌机理。结论:本实验结果显示,转化产物中大豆苷元及染料木素的转化率分别为96.63%和87.82%,其中染料木素的含量可达(703.21±4.35)mg/g,同时转化产物中还富含了灵芝菌的活性成分。其次,对转化产物抗癌活性研究发现,其能有效降低HTL-9细胞的存活率,可通过将细胞阻滞于G1期而诱导细胞晚期凋亡。此外,转化产物(100μg/ml)还可明显上调Bax、Caspase-3、Caspase-8、Cyto-c和p53的表达量,而Survivin和NF-κB表达量发生明显下调。结果表明,转化产物主要通过线粒体途径诱导细胞凋亡,但同时还调控多个与凋亡相关的基因。
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