乳鼠皮层神经元原代培养改良方法及基本电生理特性研究

目的:对原有乳鼠大鼠皮层神经元的原代培养方法进行改进,获得高质量且体外存活时间更长的神经元,以期应用于对细胞功能状态要求高的相关研究。方法:多聚赖氨酸预处理培养皿,分离出生24 h之内的SD大鼠大脑皮层神经元,采用机械吹打与胰蛋白酶化学消化相结合的方法制备单细胞悬液,经计数后以1×105/mL的细胞密度接种。24 h后加阿糖胞苷(3μg/mL)以抑制非神经细胞过度增殖。培养3d后将培养液全量换为添加B27的培养液。用倒置相差显微镜观察细胞形态,并用膜片钳单通道记录法记录BKCa通道电流。结果:对原有培养方法改进后获得可长期存活的形态典型神经元。在培养36 d时,用膜片钳单通道记录法仍能记录到正常的BKCa通道电流。结论:该培养方法简单,经济,结果稳定,可作为体外原代培养乳鼠神经元的良好实验模型。