| 摘 要： | 目的:分离纯化土曲霉来源的β-葡萄糖苷酶(At-Bgl),探究其酶学特性及其对大豆异黄酮的水解效果。创新点:成功将At-Bgl分离纯化出来,并首次将分离纯化后的At-Bgl应用于水解大豆异黄酮糖苷。方法:利用超滤、透析、阴离子交换柱层析和聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)等手段分离纯化土曲霉来源的β-葡萄糖苷酶(表1),并用解析电离串联飞行时间质谱技术(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定蛋白条带。以对硝基苯基β-D-葡萄糖苷(p NPG)为底物进行酶学特性研究;以p NPG和纤维二糖为底物,进行酶动力学参数研究(表2);以胃蛋白酶和胰蛋白酶模拟动物胃肠道酸性环境,进行酸耐受性研究。通过高效液相色谱(HPLC)检测At-Bgl对大豆异黄酮糖苷的水解效果(表3)。结论:At-Bgl属糖苷水解酶第三家族(GH3),分子量约为120 k Da(图1),最适酶解条件为p H 5.0和65°C,具有良好的热稳定性和p H稳定性(图2),且胃蛋白酶和胰蛋白酶耐受性强(图3)。At-Bgl可将大豆异黄酮糖苷高效转化为异黄酮苷元(图4)。综上所述,At-Bgl在增强动物胃肠道对大豆异黄酮的水解方面具有重要应用价值。
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