| 摘 要： | 目的:β-葡萄糖苷酶活性是新生儿坏死性小肠结肠炎早期诊断和药用植物有效成分改变的重要指标。现有活性检测方法操作时间长,试剂消耗大,且需要昂贵的仪器设备和专业的技术人员,不利于β-葡萄糖苷酶的快速、实时检测。本文尝试构建一种基于血糖仪的酶活性检测方法,为实际样品中β-葡萄糖苷酶活性的快速检测提供科学依据。创新点:首次将便携式血糖仪引入β-葡萄糖苷酶活性检测中,通过酶反应条件优化、方法学考察、实际样品中的应用以及现有方法的比较,建立β-葡萄糖苷酶活性检测新方法。方法:采用单因素试验,以酶反应溶液、pH值、反应温度、反应时间和底物浓度为指标,优化酶活性测定条件;通过考察精密度、稳定性、重复性、加样回收率、专一性等指标验证方法的可行性;通过实际样品中新方法的应用以及与现有二硝基水杨酸(DNS)法和4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(pN PG)法的比较,研究新方法在实际样品检测中的适用性。结论:酶活性测定最优条件为以柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(0.05 mol/L,pH 5.0)为反应溶液,0.03 g/mL水杨苷为底物,在50°C条件下,反应30 min。新方法具有良好的精密度、准确性、重复性、稳定性和耐用性,且不受β-葡聚糖酶、蜗牛酶、β-半乳糖苷酶、半纤维素酶和葡萄糖醛酸的影响,专一性较强。β-葡萄糖苷酶在缓冲液和大鼠血清中线性关系良好,线性范围分别为0.0873～1.5498U/m L和0.4076～2.9019U/m L。该方法已成功应用于苦杏仁、燀苦杏仁、酶制剂以及黑曲霉培养的一系列β-葡萄糖苷酶活性检测中,结果与现有方法所测的基本相符。
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