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应用昆虫体生产乳糖酶的纯化方法及理化性质的研究
作者姓名:许琳  蓝德安  胡洁泓  龙綮新  王珣章  杨璐  庞义
作者单位:Xu Lin Lan Dean Hu Jiehong Long Qingxin Wang Xunzhang Yang Lu Pang YiInstitute of Entomology and State Key Laboratory for Biological Control,Zhongshan University,Guangzhou 510275
摘    要:本文将已构建好的带有乳糖酶基因的杆状病毒(AcNPV p10 Z-9)作为载体,经口服感染人工饲养的银纹夜蛾(Argyrogra(?) agnata)幼虫,在昆虫体内高效表达乳糖酶蛋白,表达水平可占虫体可溶性蛋白的20%。将虫匀浆后,经高速离心、丙酮沉淀及冷冻干燥等方法,即可制备成粗酶。进一步经FPLC β-aminophenyl-β-D-thiogalactopyranoside亲和柱层析方法制备成精制酶,可作为试剂及药物应用.经测定纯化后的酶比活为150000u/mg蛋白。酶活力的最适pH值是6.0~8.0,最适温度为30~40℃。该酶水解对硝基苯-β-D-半乳糖(ONPG)的米氏常数(Km)值为7.14×10~(4)mol/L,乳糖可竞争性地抑制乳糖酶水解ONPG的能力,Ki值为1.30×10~(-3)mol/L。

关 键 词:重组β-D-半乳糖苷酶  昆虫杆状病毒系统  纯化  理化性质
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