基于G—三链体分子信标的多聚核苷酸激酶荧光检测新方法

G-三链体(G3)由三段连续G碱基的富G序列组成的，因其潜在的生物学功能和特殊的结构受到越来越多的关注。G3序列能结合硫磺素T(ThT)发出强荧光，以此作信号报告分子，本文提出了一种基于G3分子信标(MB)的T4多聚核苷酸激酶(PNK)荧光检测新方法。有T4 PNK时，P1的5’末端被磷酸化，P1/G3MB双链结构中的P1被外切酶酶切，封闭在G3MB中的G3序列不能结合ThT,得到弱荧光信号。无T4 PNK时，P1/G3MB双链结构能阻止外切酶酶切，G3MB被打开，释放G3序列结合ThT荧光增强。该方法对T4 PNK检测的线性范围为0.0002～0.01 U/μL,检测限为0.0002 U/μL。该方法具有操作简便、成本低和选择性高等优点，并可用于T4 PNK酶活性抑制剂的评估。